Картина “Святой Иоанн Креститель” задумана художником в начале 1500-х годов, о чем говорит набросок ангела с поднятой рукой в позе Иоанна, приколотый к листу, датируемому примерно 1504 годом. Леонардо начал над ней работать во время своего второго пребывания в Милане и продолжил работу в Риме.
Видимо, по мнению самого мастера, полотно так и не было закончено, работа над ним продолжалась даже в Амбуазе. С темного пространства картины светлым силуэтом на нас смотрит фигура юноши с поднятой рукой и прижатым к телу крестом. Мягко мерцающие в темноте струящиеся локоны обрамляют это прекрасное лицо с загадочно зовущей улыбкой и неподвижным взглядом обведенных темными тенями глаз.
В чертах лица явно читается схожесть с Монной Лизой, придающая ему несколько двусмысленный характер. Фигура носит цветущие, чувственно трепещущие формы, и только крест, как бы растворенный в пространстве картины, говорит нам, что перед нами Иоанн Креститель.